产品货号：
RFT605
中文名称：
两步法彩色PAGE凝胶快速制备试剂盒(7.5%分离胶,绿色上层胶)
英文名称：
TruePAGE Two-Step Color Rapid PAGE Gel Preparation Kit(7.5% Separating Gel, Green Stacking Gel)
产品规格：
125T
发货周期：
1～3天
产品价格：
询价
简要说明：
产品特点：
产品组成：
保存：4～8℃，有效期1年。
规格说明：
准备工作：
使用方法：
以一块0.75/1.0/1.5mm厚度的8×10cm胶为例。
相关搜索：两步法彩色PAGE凝胶快速制备试剂盒(7.5%分离胶,绿色上层胶)
本制品利用聚丙烯酰胺凝胶电泳原理，采用上层胶和下层胶的预混配方，只需加入改良型促凝剂，可在15～30分钟内配制得到高质量的聚丙烯酰胺凝胶，可用于变性和非变性蛋白凝胶电泳，适用于Tris-甘氨酸电泳体系（Laemmli体系）。本制品可以配制6%（黄色上层胶）、7.5%（绿色上层胶）、10%（蓝色上层胶）、12.5%（红色上层胶）和15%（紫色上层胶）的分离胶浓度，所配的上层胶带有颜色(黄色、绿色、蓝色、红色或紫色)，点样孔清晰易辨，方便点样，可以满足绝大多数蛋白电泳需求。
本制品配套提供改良型促凝剂，其具有更好的稳定性和催化效能，配胶过程中无需额外添加TEMED。为方便操作，已开盖使用中的改良型促凝剂，可置于4℃保存至少三个月，-20℃保存一年。
产品特点：
- 快速制备凝胶：短时间即可灌制多块凝胶，无需计算所需溶液量，无需稀释；
- 彩色上层胶：可制备五种颜色的上层胶，为点样和区分不同凝胶提供便利；
- 避免异味：无需使用TEMED，环境安全友好；
- 凝胶高稳定性：中性pH凝胶，有效提高凝胶稳定性，密封条件下，凝胶可以四度贮存6个月。
- 兼容性广：制胶溶液中不含SDS，可用于非变性电泳（Native-PAGE）。
产品组成：
| 组分 | 规格 |
| 2×上层胶溶液 | 80mL |
| 2×上层胶缓冲液 | 80mL |
| 2×下层胶溶液 | 250mL |
| 2×下层胶缓冲液 | 250mL |
| 改良型促凝剂 | 10mL |
| 刻度配胶杯 | 6个 |
保存：4～8℃，有效期1年。
规格说明：
本试剂盒大约可以配制60-125块常规大小（8×10cm）的PAGE凝胶，具体数量根据凝胶厚度决定：0.75mm厚度凝胶可以配制125块胶，1.0mm厚度凝胶可以配制至少90块胶，1.5mm厚度凝胶可以配制至少60块胶。
准备工作：
- 即用型改良型促凝剂配制：试剂盒提供的改良型促凝剂为干粉，第一次使用前加入10mL超纯水，彻底溶解后使用。配制好的即用型改良型促凝剂置于4℃备用，有效期3个月，长期不用建议-20℃贮存。
- 推荐操作：实验前半小时，取出试剂盒所有组份，常温静置半小时使溶液恢复到常温后轻柔混匀，可以有效降低制胶时产生气泡的可能性。
使用方法：
以一块0.75/1.0/1.5mm厚度的8×10cm胶为例。
- 下层胶制备：
- 根据下表配制下层胶：
胶厚度 下层胶溶液 下层胶缓冲液 促凝剂 0.75mm 2mL 2mL 40μL 1.0mm 2.5mL 2.5mL 50μL 1.5mm 4mL 4mL 80μL - 取等体积下层胶溶液和下层胶缓冲液，混匀。
- 混合溶液中加入改良型促凝剂，轻轻混匀。加入改良型促凝剂后，需轻柔混匀，防止过多氧气混入胶溶液，抑制凝胶聚合和导致凝胶内可能产生气泡。
- 将混匀后的溶液注入制胶玻璃板中，使液面和短玻璃板上沿之间的距离约1.5cm或距离梳齿下沿距离约0.5cm即可。此溶液为过量，请勿全部注入；可留少许于制胶杯中，便于判断凝胶状态。
- 封闭：沿玻璃板缓慢加入适量超纯水或醇（无水乙醇或异丙醇）覆盖于下层胶之上，待下层胶凝固后（5～15min），倒去上层水或醇，可用滤纸将残余溶液吸尽。当水（醇）和胶之间有一条折射线时，说明胶已凝固；凝胶的聚合时间与环境温度有关。夏天温度较高时，聚合较快；冬天气温低时，聚合时间会延长。下层胶25℃约5分钟可以聚合；18℃约15分钟可以聚合。
- 根据下表配制下层胶：
- 上层胶配制：
- 根据下表配制彩色上层胶：
胶厚度 上层胶溶液 彩色上层胶缓冲液 促凝剂 0.75mm 0.5mL 0.5mL 10μL 1.0mm 0.75mL 0.75mL 15μL 1.5mm 1mL 1mL 20μL - 取等体积上层胶溶液和彩色上层胶缓冲液，混匀；由于染料的特殊理化性质，使用前请摇匀彩色上层胶缓冲液。
- 向混合溶液中加入改良型促凝剂，轻轻混匀；加入改良型促凝剂后，需轻柔混匀，防止过多氧气混入胶溶液，抑制凝胶聚合和导致凝胶内可能产生气泡。
- 将混合溶液注入制胶玻璃板中，插入梳齿，待上层胶凝固后（约15～40min），拔去梳齿即可用于电泳。凝胶的聚合时间与环境温度有关。夏天温度较高时，聚合较快；冬天气温低时，聚合时间会延长。上层胶25℃ 15～20分钟可以聚合；18℃ 35～40分钟可以聚合。
- 根据下表配制彩色上层胶：
- 电泳：
- 变性电泳：
电泳缓冲液 Tris-甘氨酸-SDS电泳缓冲液 上样缓冲液 5×蛋白上样缓冲液（变性，还原） 电泳条件 恒压200V，40～55min - 非变性电泳：
电泳缓冲液 Tris-甘氨酸电泳缓冲液 上样缓冲液 5×蛋白上样缓冲液（非变性，非还原） 电泳条件 恒压150 V，50～65min 非变性电泳必看：该凝胶体系pH大约8左右，适用于等电点pI小于8的蛋白电泳分离，pI越远离8，带的负电荷越多，分离就更容易；等电点接近8或者高于8的蛋白不适合用该系统进行非变性电泳。
- 变性电泳：
- 凝胶染色或转膜：
- 凝胶染色可以选择QuickLan蛋白染色液，可以在30分钟内完成染色和脱色，也可以选择常规法考马斯亮蓝染色液。
- 转膜缓冲液可以使用湿转法或半干转方法转膜。湿转法可以使用经典10×Tris-甘氨酸转膜缓冲液(湿转)或者使用10×TrueBlot快速转膜液。半干转转膜可以使用5×快速半干转转膜缓冲液。
- 凝胶染色可以选择QuickLan蛋白染色液，可以在30分钟内完成染色和脱色，也可以选择常规法考马斯亮蓝染色液。
- 凝胶浓度选择参考：
目的蛋白分子量 下层胶浓度 压缩前沿 10kD以下 15% ~6kD 10～45kD 12.50% ~10kD 45～100kD 10% ~15kD 100～180kD 10%/7.5% ~15kD/~25kD 180～250kD 7.50% ~25kD 250kD以上 6% ~60kD
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